분자 생물학적 연구 방법과 사용

분자 생물학적 연구 방법은 현대 의학, 법의학 과학, 생물학에서 중요한 역할을한다. DNA 및 RNA 연구의 발전에 힘 입어, 사람 등 산의 혼합물 중에 원하는 핵산을 인식, 판단 원인균 유기체의 게놈을 탐색 할 수있다

분자 생물학적 방법. 그것은 무엇입니까?

위로 과학자의 70-80s에서 해독하는 첫번째이었다 인간 게놈을. 이 이벤트는 유전 공학 및 분자 생물학의 발전에 자극을 주었다. DNA와 RNA의 특성 연구는 질병 진단, 연구 유전자의 목적을 위해 이러한 핵산을 사용하는 것이 가능하다 것을 의미하고있다.

DNA 및 RNA의 제조

분자 생물학적 진단 방법은 자주 : 출발 물질을 필요로 핵산을. 살아있는 유기체의 세포에서 이러한 물질을 선택하는 방법은 여러 가지가 있습니다. 각각의 장점과 단점을 가지고 있으며, 순수한 형태로 핵산을 분리하는 방법을 선택할 때 고려되어야한다.

Marmur 의한 DNA의 제조 1. 상기 방법은, 알코올 성분의 혼합물을 처리하는 것으로 이루어진다 순수한 DNA를 침전물. 이 방법의 단점은 부식성 물질, 페놀과 클로로포름의 사용이다.

붐의 2 DNA의 분리. 여기에 사용되는 주요 물질은 - 구아니딘 티오 시아 네이트 (GuSCN)입니다. 이는 침착 촉진 디옥시리보 핵산 이이어서 특별한 버퍼에 의해 수집 될 수있는 전문 기판에있다. 그러나 GuSCN 일 - TCP의 억제제이며, 그 중도 작은 부분 핵산 작업시 중요 중합 효소 연쇄 반응의 과정에 영향을 미칠 수있는 DNA 증착 얻는다.

불순물 3. 강수량. 이 방법 자체는 dehoksiribonukleinovoy 아세트산 및 불순물을 증착되지 않은 분자에서 이전 것과는 다르다. 이렇게하려면, 이온 교환기를 사용합니다. 단점은 모든 물질이 정착 할 수 있다는 것입니다.

4. 질량 검사. 당신은 DNA 분자의 구조, 일부 통계를 얻을 필요성에 대한 정확한 정보가 필요하지 않을 때이 방법은 경우에 사용된다. 그 이유는 계면 활성제, 특히 알칼리 처리시 핵산 구조가 손상 될 수 있다는 것이다.

연구 방법의 분류

연구의 모든 분자 생물학적 방법은 세 가지 주요 그룹으로 나누어집니다 :

(효소 복수 사용) 1. 증폭. 진단 방법의 많은에 중요한 역할을 중합 효소 연쇄 반응 - 이것은 PCR이 포함되어 있습니다.

2. Neamplifikatsionnye. 방법의이 그룹은 핵산 혼합물의 작업과 직접 관련된다. 예 계내 혼성화 등의 3 종류이다 오

특정 DNA 또는 RNA 프로브에 결합하는 프로브 분자로부터의 신호의 인식에 기초하여 3 방법. 예 - 하이브리드 시스템 Hybride 캡처 시스템 솔루션 (HC2).

분자 생물학적 연구 방법에서 사용할 수있는 효소

많은 분자 진단 기술은 효소의 넓은 범위의 사용을 포함한다. 다음은 가장 자주 사용됩니다

1. 제한 효소 - 필요한 부분의 DNA 분자를 "컷".

2. DNA 폴리머 라제 - 이중 가닥 디옥시리보 핵산 분자를 합성한다.

3. 역전사 효소는 (역전사) - RNA를 템플릿에서 DNA를 합성하기 위해 사용된다.

4. DNA 리가 아제는 - 뉴클레오티드 사이의 포스 포디 에스테르 결합의 형성을 담당한다.

엑소 뉴 클레아 제 일 - 옥시 리보 핵산 분자의 단부로부터 뉴클레오티드를 제거한다.

PCR - DNA 증폭 방법의 기본적인

중합 효소 연쇄 반응 (PCR)을 널리 현대 분자 생물학에서 사용된다. 단일 DNA 분자는 사본 (증폭 분자)의 큰 수를 얻을 수있는이 방법.

PCR의 주요 기능 :

- 질병의 진단,

- 유전자를 DNA 세그먼트를 복제.

중합 효소 연쇄 반응은 다음과 같은 요소가 필요 행할 : 초기 DNA 분자, 열 안정성 DNA 중합 효소 (Taq를 또는 각각의 Pfu) 디옥시리보 뉴클레오티드 포스페이트 (질소 염기의 소스), 프라이머 (2 프라이머 1 개 DNA 분자) 자체가 수행 할 수있는 완충 시스템 모든 반응.

변성, 프라이머 어닐링 및 신장 : PCR은 세 단계로 구성되어 있습니다.

1. 변성. 94-95 섭씨 proshodit의 온도에서 DNA의 두 쇄 간의 수소 결합을 파괴하고, 그 결과, 우리는 두 단일 가닥 분자를 얻는다.

2. 어닐링 프라이머. 50-60 °의 온도에서 섭씨 상보성의 종류에 따라 단일 가닥 핵산 분자의 말단에 기탁 프라이머를 발생한다.

3. 신장. 72 도의 온도에서 두 디옥시리보 핵산 분자를 합성 딸 가닥된다.

DNA 시퀀싱

분자 생물학적 연구 방법은 종종 디옥시리보 핵산의 분자에 뉴클레오티드의 순서에 대한 지식이 필요합니다. 확인하려면 유전자 코드 염기 서열을. 미래의 분자 진단은 인간 서열의 결정에서 얻은 지식을 기반으로합니다.

순서의 다음과 같은 유형 :

• MAXAM - 길버트 시퀀싱;
• 생거 시퀀싱;
• pyrosequencing;
• nanoporovoe 시퀀싱.